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脂質(zhì)過氧化傳感器C11-BODIPY 581/591說明書

更新時間:2023-04-06      點擊次數(shù):14119

脂質(zhì)過氧化傳感器C11-BODIPY 581/591說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè),圓夢中國。
產(chǎn)品詳情

貨號

規(guī)格

價格

78EA10007-0.5mg

0.5mg

詢價

 

產(chǎn)品描述

一、 化學結(jié)構(gòu):

image.pngimage.png 

二、 檢測原理:

C11-BODIPY 581/591 是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過氧化傳感器,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,C11-BODIPY 581/591 具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對細胞內(nèi)和細胞膜中的脂質(zhì)過氧化(Lipid ROS)進行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會離開脂質(zhì)膜,該過程同時伴隨熒光信號變化。多用于熒光顯微鏡、流式細胞分析等對 Lipid ROS 的可視化監(jiān)測。C11-BODIPY 581/591 結(jié)構(gòu)中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其熒光發(fā)射峰從 590 nm偏移至 510 nm。

實驗步驟

1. 樣品溶解:

商品開封后,離心機輕甩;隨后加入適量 DMSO 進行溶解,溶解度至少可達 25mg/mL。溶解后建議分裝-20℃避光保存,盡量避免反復凍融,防止吸潮。

【注】:樣品輕甩目的是為了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。

2. 樣品使用:

1流式細胞分析:

懸浮細胞:800 g 離心 5 min 收集細胞沉淀;隨后 PBS 洗滌細胞兩遍。貼壁細胞:棄培養(yǎng)液,用常溫 PBS 或培養(yǎng)液輕洗細胞 次,隨后胰酶消化,800g 離心 5 min 收集細胞沉淀,隨后 PBS 洗滌細胞兩遍,每個樣本收集 1~5 ×105 個細胞。(注意:操作過程中輕柔吹打細胞, 消化時間不宜過長,劇烈吹打或胰酶消化過度會影響實驗結(jié)果)

C11-BODIPY 581/591 用于脂質(zhì)過氧化檢測的推薦濃度為終濃度 5μM;配制方法:用新鮮空白培養(yǎng)液配制終濃度為 5μM C11-BODIPY 581/591 染色液待用,DMSO 含量5‰。(注意:該步操作建議在消化細胞前準備好,以免細胞消化后久置影響實驗結(jié)果)

將事先配置好的脂質(zhì)過氧化染色液加入收集的細胞沉淀中,推薦體積為 500μL,隨后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期間 5-10min 間隔輕彈細胞使其懸浮保證染色更充分。

染色結(jié)束后,800 g 離心 5 min,棄上清,隨后用PBS 清洗細胞 次,加入 200μLPBS 重懸細胞用于流式分析。

2) 原位成像:

接種適當密度的細胞于 20mm 規(guī)格的蓋玻片上(也可用共聚焦小皿替代),給予實驗藥物處理適當時間后,吸去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌細胞一遍加入 500 μL 配制好的脂質(zhì)過氧化染色液,于 37℃染色 30min;(配制方法參考流式分析中的染色液配制)棄培養(yǎng)液,PBS 洗滌細胞兩遍后熒光顯微鏡或激光共聚焦下進行成像檢測。細胞在染色后應在 1 h 之內(nèi)完成檢測。

 

3)檢測條件:

該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長為 581 nm, 發(fā)射為 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長為 500 nm,發(fā)射在 510nm。因此,在流式分析中檢測通道為 FL1-A;激光共聚焦檢測:氧化態(tài)激發(fā)波長可選488nmFITC)通道;還原態(tài)激發(fā)波長可選 561 nmTRITC)通道。

 

 

實驗案例分析

流式分析實驗范例:

使用本試劑檢測 10 μM RSL3(鐵死亡經(jīng)典誘導劑)處理 A549 細胞 24 h 后的細胞脂質(zhì)過氧化水平的流式檢測

image.png 

 

原位成像實驗范例:

下圖為 RSL310 μM)處理A549 細胞 24 h 后,使用本試劑(5μM)對活細胞中脂質(zhì)過氧化水平進行原位染色后激光共聚焦成像結(jié)果。

 

image.png 

 

 

注意事項

1. 此試劑盒僅供科研使用。

2. 使用前小心離心數(shù)秒取用,需佩戴手套操作,注意避免與皮膚、眼睛和黏膜接觸。

3. 本試劑盒可用檢測活細胞中 Lipid ROS 水平,用于評價細胞鐵死亡狀態(tài)。


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