人：HeLa 報告細胞系（包括 I-Sce1 轉染）

SKU：DR3000-HRHeLa-Sce

分類：細胞背景 DNA 修復,同源重組報告細胞 標簽：DNA 修復,同源重組, HR DNA 報告基因

用于詢問同源修復 (HR) 通路（I-Sce1 轉染）的基于細胞的篩選試劑盒

動物細胞中的 DNA 修復途徑可分為兩大類：HR 和 NHEJ。HR 或同源重組是次要途徑，但在保護細胞免受基因毒性方面非常重要。HR 需要同源序列并且僅限于 S 期。基于特定報告基因的 HR 分析對于抗癌藥物發(fā)現項目非常有益，可以更多地了解 DNA HR 修復過程以及建立交叉通路和可藥物通路靶點。

這是一款基于 HeLa 細胞的報告試劑盒，旨在讓客戶篩選或識別影響或影響 HR DNA 修復過程的試劑（藥物、天然產物、小分子、合成物、miRNA 和基因）。該試劑盒使用 GFP 作為HR 通路的原位讀數。

DNA 不斷暴露于基因毒劑，導致基因表達、一級序列、易位等發(fā)生變化，所有這些都是疾病的先兆。在各種形式的 DNA 損傷中，最危險的是 DNA 雙鏈斷裂 (DSB)，這主要是由于失去野生型序列以恢復基因組完整性。為了應對 DSB 帶來的威脅，細胞已經開發(fā)出多種機制來檢測、發(fā)出信號并修復 DNA。

兩條主要途徑，同源重組 (HR) 和非同源末端連接 (NHEJ)，參與 DSB 的修復。這些途徑可以進一步細分為特定的子途徑過程。這些途徑在很大程度上彼此不同，并且以互補的方式發(fā)揮作用。雖然 NHEJ 不依賴于細胞周期，但 HR 強烈依賴于 S 期。NHEJ 涉及沒有同源性的兩個 DNA 末端的連接，并且往往容易出錯，而 HR 具有高保真度并且基本上沒有錯誤。在 HR（有時稱為基因轉換）中，與 DSB 兩側具有同源性的供體 DNA 序列提供遺傳信息以修復斷裂。同源序列被復制到斷裂的基因座中，使修復的基因座成為供體序列的精確副本，而不改變供體序列（圖 1）。

設計了一個基于細胞/細胞環(huán)境的系統，以允許研究人員檢查和詢問活 HeLa 細胞中的 HR 過程。HR 試劑盒使用雙 GFP 盒，通過同源重組 (HR) 將 GFP 陰性細胞轉化為 GFP 陽性細胞。由于野生型（同源）GFP 片段存在于 DNA 斷裂附近，因此將通過 HR（作為基因轉換）進行 DNA 修復。為了引入精確的 DNA 切割，巨型核酸內切酶 (I-Sce1) 在 Cassette 1 的 GFP 基因座中引入 DS 斷裂（圖 1）。值得注意的是，人類基因組不包含 I-Sce1 位點。因此，Cassette 1 中的 I-Sce1 位點意味著 DS 斷裂僅發(fā)生在該精確位置，而不發(fā)生在基因組的其他位置。DS 斷裂啟動 HR，并使用 WT 序列作為同源模板（位于盒 2 中），基因轉化為 WT，出現 GFP 陽性細胞（圖 2）。HR 由 DS 斷裂觸發(fā)，這是通過用 I-Sce1 表達質粒轉染細胞實現的（圖 2）。該技術適用于活細胞成像（通過跟蹤單個 GFP+ 細胞）。實時成像為這些細胞中的 HR 分析提供了基本的單細胞分辨率。此外，可以追蹤 DNA 修復的后代，因為這些細胞也是 GFP 陽性的。有關實時成像的更多詳細信息，請參閱下面的視頻。實時成像為這些細胞中的 HR 分析提供了基本的單細胞分辨率。此外，可以追蹤 DNA 修復的后代，因為這些細胞也是 GFP 陽性的。有關實時成像的更多詳細信息，請參閱下面的視頻。實時成像為這些細胞中的 HR 分析提供了基本的單細胞分辨率。此外，可以追蹤 DNA 修復的后代，因為這些細胞也是 GFP 陽性的。

細胞背景 DNA 修復

1. HR-HeLa 細胞準備在 T-25 瓶中培養(yǎng)或作為冷凍細胞沉淀（客戶可以要求）。我們向希望儲存細胞以備將來使用的客戶提供冷凍細胞。我們還可以將活細胞發(fā)送給希望立即開始使用該生產線的客戶。

2. I-Sce1 基因表達質粒。

3. 詳細的協議描述了如何設置和使用該試劑盒來檢測所提供的細胞宿主中的 HR 機制。