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PureBind 血液基因組 DNA 分離試劑盒說明書

更新時間:2021-05-31      點擊次數:1083

 

 

oceannanotech PureBind 血液基因組 DNA 分離試劑盒說明書

PureBind Blood gDNA Isolation Kit 專門設計用于從全血中以高產量和純度分離基因組 DNA。特殊包被的磁珠可實現(xiàn)高 DNA 結合能力并將來自各種樣品的污染降至。該試劑盒具有適用于不同檢測形式(試管、96 孔形式、自動化)以及各種血樣體積(10 μL-10 mL)的靈活性。從全血中獲得的 DNA 純度高(A260/280 ≥ 1.8,A260/230 ≥ 1.4),適用于各種下游應用。該套件與各種商業(yè)血液穩(wěn)定劑管和抗凝劑兼容。

 

oceannanotech B0711

 
 

高分子量基因組 DNA:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離出高分子量的高分子量基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。500 納克純化的 DNA 在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上與 GeneRuler™1kb Plus 階梯(Thermo Scientific)一起電泳;最上面的 DNA 梯帶是 20,000 bp。

來自全血的高純度基因組 DNA,不含 RNase:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離的高純度基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。通過分光光度法分析洗脫的DNA以確定純度比和DNA濃度。

來自全血的無抑制劑基因組 DNA:分離的基因組 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共純化的抑制劑。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中詳述的,對 100 ng 洗脫的 DNA 進行了抑制 SPUD 擴增子擴增的能力分析。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。

 

基因組靶標的成功qPCR擴增:對分離的基因組DNA的qPCR分析表明,基因組靶標的成功擴增和檢測。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 ABI TaqMan™ β-肌動蛋白 qPCR 測定法測定標稱 20 ng 洗脫的 DNA(基于 Nanodrop 分析)。標準曲線跨越了 100 – 0.032 ng(27,600 – 8.8 個基因組當量)的人類 DNA。測定效率計算為 102%。

分離的基因組 DNA 的酶促修飾:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。1 µg 純化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分鐘。此后限制性產物在1%瓊脂糖凝膠/TAE上電泳1小時。

 

從分離的基因組和線粒體 DNA 進行長距離 PCR 使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進行長距離 PCR。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖腦苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 線粒體 NADH-泛醌氧化還原酶鏈 1 (MT-ND1) 片段的引物,通過 PCR 擴增 20 ng 純化 DNA。 PCR 產物在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上電泳 1 小時。這些高分子量目標的成功 PCR 擴增突出了分離 DNA 的結構完整性和我們的試劑盒分離線粒體 DNA 的能力。

與商業(yè)血液穩(wěn)定劑管的兼容性: 血液基因組 DNA 試劑盒可用于從商業(yè)血液穩(wěn)定劑管中分離不含抑制劑的 gDNA。將捐獻者血液抽取到 3 種市售血液穩(wěn)定產品中,并在室溫下儲存 4 天。使用標準方案通過 Ocean NanoTech 試劑盒處理來自試管的 350 µL 等分試樣。作為穩(wěn)定過程的一部分,DNA/RNA Shield™ 管也沒有使用 Ocean NanoTech 裂解緩沖液進行處理,因為 DNA/RNA Shield™ 裂解細胞。如分析生物化學,2006 年 4 月 15 日;351(2):308-10 中詳述的,測定了從每次分離中洗脫的 100 ng DNA 抑制 SPUD 擴增子擴增的能力。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。

性能與其他商用產品的對比: Ocean NanoTech的Blood gDNA試劑盒大大優(yōu)于其他基于磁珠的血液gDNA分離試劑盒。來自同一供體的血液被吸入 K2-EDTA 管中,并使用試劑盒所需的輸入血量通過每個試劑盒處理。分離的 DNA 以 100 µL 洗脫,并通過 NanoDrop 分析和 Qubit 分析評估純度。計算每個試劑盒的總產量(基于 Qubit 測量)和作為血液輸入量函數的產量。所有值均來自三個生物學重復。

 

    特征:
    • 無RNA污染。
    • 來自全血的高分子量 gDNA,不需要 RBC 和 WBC 的差異裂解。
    • 分離 > 9 微克 DNA/350μL 輸入血樣。
    • 與商業(yè)穩(wěn)定劑管(例如 PAXgene Blood DNA 管、BioMatrica DNAgard Blood)兼容。
    • 自動化友好的 KingFisher(Duo、Duo Primer 和 Flex)腳本可用。
目錄#產品單元尺寸單價
B0711-096PureBind血液基因組DNA分離試劑盒1微米199.00 美元
B0711-384PureBind血液基因組DNA分離試劑盒10納米$ 677.00
產品描述PureBind血液基因組DNA分離試劑盒
應用從全血中分離核酸

 

 

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