ELISA原理：

該測定基于夾心ELISA技術，其中將對組裝的AAV衣殼上的構象表位具有特異性的單克隆抗體（mab）涂在板上，并用于從樣品中捕獲AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測過程分為兩個步驟。

1. 生物素偶聯(lián)的單克隆抗體與捕獲的AAV顆粒結合。
2. 鏈霉親和素過氧化物酶綴合物與生物素分子反應。底物的添加導致顯色反應，該顯色反應與特異性結合的病毒顆粒的量成比例。

AAV定量方法的比較：

每種常用的量化方法都有其優(yōu)點和缺點：

• qPCR已被廣泛使用，但存在一些問題，例如樣品制備，引物設計或PCR效率，這些問題可能導致實驗室間結果之間的高度差異。
• 數(shù)字液滴PCR方法克服了qPCR的某些局限性。但是，由于樣品處理方案的不同，實驗室之間的差異仍然可能發(fā)生。
• 如果使用可靠的參考材料，則斑點印跡是一種簡單且定量的方法。然而，它通常受蛋白質印跡的線性和動態(tài)范圍的限制。

考慮到上述技術的實際缺點，目前常規(guī)的夾心ELISA在實驗室間和實驗室內(nèi)的變異以及易于使用方面似乎是*的。因此，它代表了可靠的和可重復的總rAVV衣殼滴度定量分析的格式。

改組/變異的AAV的使用：

改組/突變的AAV載體的識別取決于受改組/突變影響的特定衣殼區(qū)域。用于PROGEN的AAV ELISA的捕獲抗體結合特異性的（在某些情況下還定義為良好的構象表位）。這些表位是由相應的AAV血清型的衣殼組件產(chǎn)生的。ELISA可能識別您改組/突變的AAV載體的一個跡象是抗體結合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質序列的變化也可能影響蛋白質的構象，因此，AAV衣殼上呈現(xiàn)的表位的構象。這可能會影響抗體的結合親和力，并影響基于AAV ELISA試劑盒隨附的（非改組）試劑盒對照的效價測定。由于這些屬性在很大程度上取決于所執(zhí)行的特定改組/突變，因此PROGEN無法保證對改組/突變的AAV向量進行成功且定量。即使在改組/突變的AAV衣殼上仍存在抗體結合表位，也需要針對您的特定AAV載體測試和優(yōu)化您的檢測方法。

PROGEN強烈建議您生產(chǎn)和校準合適的（改組/突變）試劑盒對照品，以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定滴定的AAV載體的滴度。

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