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ArcticZymes C5015說明書

更新時間:2020-06-19      點擊次數(shù):666

ArcticZymes是世界*的核酸雜質(zhì)去除解決供應商,擁有全套核酸去除解決方案,歡迎咨詢。

關鍵詞 Benzonase ; DNA去除 ;RNA去除;核酸去除

 

ArcticZymes C5015說明書

尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase, UNG)

產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱規(guī)格
C5015AUNG (Uracil N-Glycosylase)1,000U
C5015B5,000U
A0303dNTP/dUTP Mixture1 ml
尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 為來源于E. coli uracil N-glycosylase基因的重組表達蛋白,分子量為26kDa。它可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶,但對RNA無活性。 UNG主要應用于PCR擴增產(chǎn)物的防污染,作用原理基為:如果在PCR反應中以dUTP替代dTTP摻入DNA中,形成了含dU堿基的PCR擴增產(chǎn)物,該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U基的糖苷鍵,降解該PCR擴增產(chǎn)物。

組分

組分名稱數(shù)量
Uracil N-Glycosylase (5 U/μl)200 μl/1 ml

應用

  • 去除單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧啶堿基
  • 去除 PCR 殘存污染

活性定義

 

在標準PCR反應體系下,37℃條件下,1小時降解1µg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為一個活性單位。

活性測試

UNG酶活性測試
取1μg dUTP PCR產(chǎn)物,用UNG 37℃消化30min后進行瓊脂糖凝膠電泳。 Lane 1:對照(不加UNG酶);Lane 2-7:分別為 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37度消化30min后的PCR產(chǎn)物;M:D2000 DNA Marker。

性能測試

UNG酶性能測試
UNG在標準PCR體系下(50ul體系)性能測試。 處理方法為:在反應體系中分別加入不同量的UNG(如圖所示),50度2min,95度5min,然后進入PCR循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳。Lane 1-3:標準dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U; Lane 4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;M:D10000 DNA Marker。

反應buffer

Uracil DNA Glycosylase (UNG)與絕大多數(shù)的PCR 聚合酶反應緩沖液都是兼容的,但在高離子濃度(>100mM)下活性會受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

儲存

-20℃可保存2年,避免反復凍融。

熱失活

95℃,5min。
UNG酶熱失活
取1μg dUTP PCR產(chǎn)物進行UNG熱失活測試。 Lane 1:對照(不加UNG酶);Lane 2: 1U UNG酶37度消化30min;Lane 3: 1U UNG酶95度加熱5min后,再加入PCR產(chǎn)物消化(37度消化30min); Lane 4: 1U UNG酶95度加熱10min后,再加入PCR產(chǎn)物消化(37度消化30min);M: D2000 DNA Marker。

 

 

 

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