ArcticZymes C5015說明書
更新時間:2020-06-19 點擊次數(shù):666
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關鍵詞 Benzonase ; DNA去除 ;RNA去除;核酸去除
ArcticZymes C5015說明書
尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase, UNG)
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | C5015A | UNG (Uracil N-Glycosylase) | 1,000U | C5015B | 5,000U | A0303 | dNTP/dUTP Mixture | 1 ml |
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尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 為來源于E. coli uracil N-glycosylase基因的重組表達蛋白,分子量為26kDa。它可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶,但對RNA無活性。 UNG主要應用于PCR擴增產(chǎn)物的防污染,作用原理基為:如果在PCR反應中以dUTP替代dTTP摻入DNA中,形成了含dU堿基的PCR擴增產(chǎn)物,該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U基的糖苷鍵,降解該PCR擴增產(chǎn)物。 |
組分 |
組分名稱 | 數(shù)量 | Uracil N-Glycosylase (5 U/μl) | 200 μl/1 ml |
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應用 |
- 去除單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧啶堿基
- 去除 PCR 殘存污染
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活性定義 在標準PCR反應體系下,37℃條件下,1小時降解1µg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為一個活性單位。 | 活性測試 | 取1μg dUTP PCR產(chǎn)物,用UNG 37℃消化30min后進行瓊脂糖凝膠電泳。 Lane 1:對照(不加UNG酶);Lane 2-7:分別為 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37度消化30min后的PCR產(chǎn)物;M:D2000 DNA Marker。 | 性能測試 | UNG在標準PCR體系下(50ul體系)性能測試。 處理方法為:在反應體系中分別加入不同量的UNG(如圖所示),50度2min,95度5min,然后進入PCR循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳。Lane 1-3:標準dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U; Lane 4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;M:D10000 DNA Marker。 | 反應buffer | Uracil DNA Glycosylase (UNG)與絕大多數(shù)的PCR 聚合酶反應緩沖液都是兼容的,但在高離子濃度(>100mM)下活性會受到抑制。 | 酶保存液 | 20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 | 儲存 | -20℃可保存2年,避免反復凍融。 | 熱失活 | 95℃,5min。 | 取1μg dUTP PCR產(chǎn)物進行UNG熱失活測試。 Lane 1:對照(不加UNG酶);Lane 2: 1U UNG酶37度消化30min;Lane 3: 1U UNG酶95度加熱5min后,再加入PCR產(chǎn)物消化(37度消化30min); Lane 4: 1U UNG酶95度加熱10min后,再加入PCR產(chǎn)物消化(37度消化30min);M: D2000 DNA Marker。 |
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