arcticzymes Cod UNG說明書

Cod Uracil-DNA Glycosylase

鱈魚尿嘧啶-DNA糖基化酶

來自大西洋鱈魚的鱈魚尿嘧啶-DNA糖基化酶（Cod UNG）是通過中度熱處理*不可逆地滅活的UNG酶。該酶在含有修飾的Cod UNG基因的重組大腸桿菌（ung-）菌株中產(chǎn)生。

高魯棒性

不耐熱，在55°C時(shí)*不可逆轉(zhuǎn)地失活

污染控制

RT-PCR，RT-qPCR，qPCR和kPCR中污染控制的理想選擇

PCR后分析

啟用PCR后分析

真正的不耐熱尿嘧啶DNA糖基化酶

當(dāng)今市場上有幾種可商購的尿嘧啶-DNA糖基化酶。如果您不打算在PCR后進(jìn)一步分析PCR產(chǎn)物，則其中大多數(shù)是細(xì)菌來源的，效果很好。但是，如果要存儲(chǔ)PCR產(chǎn)物用于下游分析（例如克隆和測序），則UNG的重新激活和隨后PCR產(chǎn)物的降解是大多數(shù)商用UNG的問題。來自ArcticZymes的Cod UNG是當(dāng)今一種可*加熱且不可逆地失活的UNG。

圖1.*，不可逆地?zé)釡缁畹腢NG是Cod UNG。

如圖1所示，其中測試了各種UNG在熱滅活后的殘留活性。用dUTP和1個(gè)單位的5種不同的市售UNGs進(jìn)行PCR。PCR后，將PCR產(chǎn)物在室溫下孵育各種時(shí)間間隔，然后加熱并隨后冷卻。PCR產(chǎn)物的凝膠電泳顯示UNG重新活化，因此，除了Cod UNG外，所有測試的所有UNG的PCR產(chǎn)物都嚴(yán)重降解。

圖2.用1 U Cod UNG（A）或1 U E.coli UNG（B）預(yù)處理并在室溫下孵育3小時(shí)的測序PCR產(chǎn)物的色譜圖。只有Cod UNG保留序列質(zhì)量不變。

通過對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，進(jìn)一步評(píng)估了PCR后序列的質(zhì)量和完整性。用添加到預(yù)混物中的四種不同的市售UNG之一進(jìn)行PCR。PCR后，將PCR產(chǎn)物在室溫或4°C下以不同的時(shí)間間隔孵育。隨后將樣品純化并測序。*分析了序列數(shù)據(jù)，重點(diǎn)是由于UNG重新激活而降低了序列質(zhì)量。如圖2和圖3所示，用UNG處理的樣品，除用Cod UNG處理的樣品外，由于UNG的再活化而顯示出嚴(yán)重的PCR產(chǎn)物降解。

0h6h24hControlCod UNGSupplier ASupplier BSupplier C0100200300400500600700800900Amplicon length (bp)

圖3. UNG重新激活導(dǎo)致序列降解。經(jīng)各種UNG預(yù)處理并在室溫下孵育的PCR產(chǎn)物的序列數(shù)據(jù)。除與Cod UNG一起溫育的樣品外，所有樣品均顯示UNG的重新活化和PCR產(chǎn)物的嚴(yán)重降解。

聚合酶鏈反應(yīng)

Cod UNG適用于所有市售的預(yù)混料。確保在先前的PCR實(shí)驗(yàn)中使用了包含dNTP混合物的dUTP。

• 將0.25 U Cod UNG直接添加到25 µl PCR反應(yīng)中
• 在室溫下預(yù)孵育5分鐘
• 運(yùn)行PCR

在分析之前，將PCR產(chǎn)物在-20°C或4°C的溫度下保存盡可能長的時(shí)間。

一站式RT-PCR

• 將0.2 U Cod UNG直接添加到您的20 µl RT-PCR反應(yīng)中
• 在室溫下預(yù)孵育5分鐘
• 在50- 55°C下逆轉(zhuǎn)錄您的RNA
• 運(yùn)行PCR

物產(chǎn)

Cod UNG適用于所有市售的預(yù)混料。確保在先前的PCR實(shí)驗(yàn)中使用了包含dNTP混合物的dUTP。

• 將0.25 U Cod UNG直接添加到25 µl PCR反應(yīng)中
• 在室溫下預(yù)孵育5分鐘
• 運(yùn)行PCR

在分析之前，將PCR產(chǎn)物在-20°C或4°C的溫度下保存盡可能長的時(shí)間。