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genetargetsolutions電動(dòng)大腸桿菌

更新時(shí)間：2019-12-27 點(diǎn)擊次數(shù)：1368

genetargetsolutions電動(dòng)大腸桿菌

TransforMax™EPI300™電動(dòng)大腸桿菌

應(yīng)用領(lǐng)域

使用CopyControl™克隆系統(tǒng)生成可誘導(dǎo)的拷貝數(shù)克隆。

TransforMax™EPI300™ 大腸桿菌 細(xì)胞缺少 tonA 基因，經(jīng)過改造可與Epicentre的CopyControl™cDNA，基因和PCR克隆試劑盒以及其他不需要噬菌體T1抗性細(xì)胞的CopyControl克隆系統(tǒng)一起使用。細(xì)胞包含可誘導(dǎo)的突變體 trfA 基因，其基因產(chǎn)物是從ori V 復(fù)制起點(diǎn)開始復(fù)制所必需的，例如在CopyControl pCC1™載體中。在LB氯霉素平板上或在補(bǔ)充氯霉素的LB或SOC培養(yǎng)基中，在TransforMax EPI300 大腸桿菌中生長(zhǎng)的CopyControl克隆從F因子復(fù)制子以單拷貝數(shù)復(fù)制，因?yàn)?em>trfA的表達(dá) 基因被抑制。加入CopyControl誘導(dǎo)溶液可誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá) trfA 基因產(chǎn)物，并誘導(dǎo)其從ori V 以高拷貝數(shù)復(fù)制（圖1）。從ori V 復(fù)制可產(chǎn)生更高的產(chǎn)量和更高的克隆DNA純度。好處

克隆的拷貝數(shù)受到與trfA 基因連接的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的嚴(yán)格控制。
具有各種大小的克隆的高轉(zhuǎn)化效率。
lacZΔM15 用于重組體的藍(lán)/白篩選。
限制-負(fù)[ mcrA，Δ（mrr-hsdRMS-mcrBC）]表型能夠有效克隆甲基化DNA。
核酸內(nèi)切酶負(fù)號(hào)（endA1），以確保高產(chǎn)量的DNA。
重組減號(hào)（recA1），用于較大插入片段克隆的更高穩(wěn)定性。

基因型

F- mcrAΔ（mrr-hsdRMS-mcrBC）Φ80dlacZΔM15ΔlacX74recA1 endA1 araD139Δ（ara，leu）7697 galU galKλ-rpsL（StrR）nupG trfA dhfr

TransforMax EPI300電 感受態(tài)大腸桿菌

pUC19的轉(zhuǎn)化效率> 1 x 1010 cfu / µg。

TransforMax EPI300具有化學(xué)活性的 大腸桿菌

pUC19的轉(zhuǎn)化效率> 5 x 108 cfu / µg。

圖1.在TransforMax™EPI300™ 大腸桿菌中， 可以將CopyControl™BAC克隆的拷貝數(shù)誘導(dǎo)10到20倍 。加入CopyControl誘導(dǎo)溶液后，來自CopyControl BAC克隆的110-145 kb BAC DNA的產(chǎn)量增加了14倍以上。U =未誘導(dǎo)的細(xì)胞；I ＝誘導(dǎo)的細(xì)胞。