btxonline PROTOCOL 0024說(shuō)明書

PROTOCOL 0024

電解槽機(jī)械手ECM 600電穿孔協(xié)議
乳球菌亞種。乳酸菌LM0230
DNA:pGB301

ECM 630電協(xié)議

電解槽機(jī)械手ECM 600電穿孔協(xié)議
乳球菌亞種。乳酸菌LM0230
DNA:pGB301
細(xì)胞準(zhǔn)備：
生長(zhǎng)培養(yǎng)基：M17 Glu或M17 Lac
溫度：37攝氏度
電池密度：5 x 1010 CFU/ml
溫度：冰鎮(zhèn)
洗滌程序：顆粒5500 x g，4oC，10分鐘
洗滌1：再次洗滌，10毫升無(wú)菌冷dd-H2O
顆粒1200 x g至4oC，10分鐘
洗滌2：再次洗滌，10毫升無(wú)菌冷dd-H2O
顆粒1200 x g至4oC 15分鐘
洗滌3：再次洗滌，1毫升無(wú)菌冷dd-H2O
4oC下顆粒大速度3分鐘
終稀釋：再次使用1.25毫升無(wú)菌冷dd-H2O
（等份可在冰上保存不超過(guò)兩小時(shí)）

電穿孔設(shè)置：
選擇方式：T 2.5kV/電阻高壓（HV）
設(shè)置電容：C高壓時(shí)默認(rèn)設(shè)置為50μF
設(shè)置電阻：R5（129歐姆）
腔室間隙：BTX一次性反應(yīng)杯P/N 610（1mm間隙）
BTX扁平封裝室P/N 486（0.56 mm間隙）
設(shè)置充電電壓：S如果使用1毫米，設(shè)置1.70千伏
如果使用0.56毫米，設(shè)置0.95千伏
估計(jì)場(chǎng)強(qiáng)：17千伏/厘米
期望脈沖長(zhǎng)度：t 5毫秒
電穿孔程序：
樣品體積：70μl
轉(zhuǎn)染體積：0.003-0.94μg
工作溫度：0oC-電穿孔前在冰上冷卻裝滿反應(yīng)杯
脈沖：按A啟動(dòng)自動(dòng)充電和脈沖序列
稀釋介質(zhì)：M17-葡萄糖肉湯系列稀釋液1:5，1:10，1:100
孵育：30oC，2小時(shí)
選擇方法：M17-Glu瓊脂上的抗生素選擇板
結(jié)果：1 x 103
轉(zhuǎn)化子/μg DNA
參考文獻(xiàn)：MyIntyre DA and Harlander SK，應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)，55（3）：604-610，1989（BTX ID#447）