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酵母展示載體

pYDS1（貨號(hào)：mAb001）

pYDS1是一種酵母展示載體，用于在酵母菌株EBY100表面展示單體scFv。AGA1是酵母細(xì)胞表面蛋白，AGA2通過(guò)2個(gè)二硫鍵與AGA1偶聯(lián)。通過(guò)鉸鏈與AGA2的C末端融合，scFv顯示在酵母表面。設(shè)計(jì)scFv的N末端的標(biāo)志標(biāo)簽和C末端的V5標(biāo)簽，以便通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)方便地檢測(cè)scFv的表達(dá)和抗原結(jié)合。（G4S）3柔性接頭被設(shè)計(jì)為VL和VH之間的內(nèi)部接頭。該載體設(shè)計(jì)用于VL和VH的逐步克隆，并且VH和VL克隆的所有酶位點(diǎn)均未出現(xiàn)在VH和VL種系基因中，并且翻譯的氨基酸有利于形成柔性接頭。 

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pYDS1.1 （Cat＃：mAb002）

pYDS1.1與pYDS1的單體scFv展示相似，只是VL和VH的多個(gè)克隆位點(diǎn)縮短至9 bp，這允許使用PCR純化試劑盒直接純化線性化載體，而無(wú)需通過(guò)凝膠去除9 bp插入片段分離。該載體被設(shè)計(jì)用于VL和VH的一步克隆，既可以組裝成scFv，也可以通過(guò)三個(gè)片段缺口修復(fù)。酵母具有的同源重組系統(tǒng)，該系統(tǒng)可通過(guò)為三個(gè)片段設(shè)計(jì)的同源末端將共轉(zhuǎn)化的線性化載體VL和VH有效地組裝成正確的向量scFv形式。 

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pYDS2 （貨號(hào)：mAb003）

如果將分離的scFv的終目標(biāo)設(shè)計(jì)為二聚體，例如scFv-Fc或全抗體，則建議使用二聚體-scFv庫(kù)，因?yàn)楦哂H和力單體scFv可能無(wú)法轉(zhuǎn)化為更高親和力的二聚體。明智的方法是直接隔離具有較暗淡形式的高親和力的scFv。pYDS2是為此目的而設(shè)計(jì)的。通過(guò)鉸鏈區(qū)中的天然3個(gè)二硫鍵，在酵母表面上顯示出較暗的scFv。pYDS2設(shè)計(jì)用于像pYDS1一樣逐步克隆VL和VH。所有標(biāo)簽，接頭和酶位點(diǎn)均與pYDS1相同，可進(jìn)行有效的基因克隆，靈活的接頭和方便的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)scFv。
 

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酵母分泌表達(dá)載體
 

pYS1 （Cat＃：mAb004） 和pYS2 （Cat＃：mAb005）

通過(guò)磁性和流式分選富集抗原特異性酵母展示種群后，可以使用流式細(xì)胞儀鑒定高親和力的單個(gè)scFc克隆。然而，這是費(fèi)時(shí)和費(fèi)力的，并且顯示scFv需要稍后為了親和力和其他表征而轉(zhuǎn)化為可溶形式。如果將展示型scFv轉(zhuǎn)化為可溶性scFv，然后使用高通量ELISA鑒定單個(gè)克隆，則效率更高。pYS1和pYS2載體pYDS1，pYDS1.1和pYDS2的對(duì)應(yīng)物被設(shè)計(jì)用于可溶性scFv表達(dá)。只需使用PCR從富集的展示酵母種群中擴(kuò)增scFv基因，并與線性化載體pYS1，pYS1.1或pYS2共轉(zhuǎn)化為YVH10酵母菌株，挑選單個(gè)克隆，在96個(gè)深孔板中培養(yǎng)并誘導(dǎo)，含有scFv的上清液可用于ELISA鑒定?？梢詮?6孔儲(chǔ)備液中擴(kuò)增陽(yáng)性克隆，以進(jìn)行大規(guī)模scFv純化以進(jìn)一步表征。載體pYS1與pYDS1和pYDS1.1配對(duì)用于單體scFv表達(dá)，而pYS2與pYDS2對(duì)用于調(diào)光scFv表達(dá)。
 

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噬菌體展示載體

pDCK1 （Cat＃：mAb006） 和pDCL1 （Cat＃：mAb007）

載體pDCK1和pDCL1分別包含IgG1的CH1恒定區(qū)，kappa和λ恒定區(qū)，用于Fab展示，只需將VL / VK和VH克隆到載體中即可。所有恒定區(qū)均針對(duì)大腸桿菌表達(dá)進(jìn)行了密碼子優(yōu)化，并且為有效消化和連接而設(shè)計(jì)的所有酶位點(diǎn)均未出現(xiàn)在抗體V基因中。已經(jīng)為VK / VL和VH克隆酶設(shè)計(jì)了長(zhǎng)填充序列，以進(jìn)行有效的酶消化。這兩個(gè)載體也可以用于使用Xba I / Not I消化的噬菌體展示scFv庫(kù)構(gòu)建。

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pDCK1.1 （Cat＃：mAb008） 和pDCL1.1 （Cat＃：mAb009）

pDCK1.1和pDCL1.1載體分別與pDCK1和pDCL1相同，不同之處在于VK / VL和VH克隆酶的填充序列縮短到9bp，從而可以通過(guò)PCR純化試劑盒方便地純化消化的載體，而無(wú)需人工操作消耗凝膠分離。 
 

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雙順?lè)醋勇《据d體

pLENI （Cat＃：mAb010） 和pLEN2A （Cat＃：mAb011）


建立抗原陽(yáng)性細(xì)胞系對(duì)于基于細(xì)胞的抗體文庫(kù)淘選和隨后驗(yàn)證分離的抗體是必需的。慢病毒載體pLENI和pLEN2A設(shè)計(jì)用于同時(shí)雙順?lè)醋颖磉_(dá)目的蛋白和EGPF。EGFP將在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，以方便觀察成功的病毒感染和基因表達(dá)，以及通過(guò)FACS（熒光激活細(xì)胞分選）純化高表達(dá)細(xì)胞。如果目的蛋白質(zhì)是細(xì)胞膜蛋白質(zhì)，則翻譯的蛋白質(zhì)將位于細(xì)胞表面。載體pLENI使用IRES（內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)）序列連接目標(biāo)基因和EGFP基因，以確保兩種蛋白質(zhì)的mRNA表達(dá)水平相同；而載體pLEN2A使用2A序列來(lái)確保兩種蛋白的蛋白表達(dá)水平相同，它會(huì)被內(nèi)體2A位點(diǎn)的酶切割所分離。通過(guò)將pLENI或pLEN2A與提供VSVG，REV和Gag / pol蛋白表達(dá)的載體共轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中，可以輕松制得慢病毒。
 

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大腸桿菌  表達(dá)載體

pECO （貨號(hào)：mAb012）

載體pECO設(shè)計(jì)用于通過(guò)大腸桿菌從強(qiáng)噬菌體T7啟動(dòng)子高水平表達(dá)目的基因。所有的酶都是為方便和有效的基因克隆而設(shè)計(jì)的。沒(méi)有為此向量設(shè)計(jì)的標(biāo)簽。為了方便純化，可以根據(jù)需要在目的蛋白的N或C端設(shè)計(jì)His6標(biāo)簽。IPTG誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)。
 

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哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體
 

pMAM1 （貨號(hào)：mAb013）

載體pMAM1設(shè)計(jì)用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞（例如CHO或HEK293細(xì)胞）中表達(dá)分泌蛋白。強(qiáng)大的CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)蛋白質(zhì)表達(dá)，由B淋巴細(xì)胞中大多數(shù)抗體分泌固有的VH3信號(hào)肽引導(dǎo)，然后是His8標(biāo)簽以方便蛋白質(zhì)純化。設(shè)計(jì)了多個(gè)克隆位點(diǎn)中的酶以方便，地克隆基因。重組蛋白可以直接從上清液中純化。如果使用無(wú)血清哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，則一步純化鎳樹脂可產(chǎn)生高純度的蛋白質(zhì)。新基因表達(dá)盒允許通過(guò)G418選擇建立穩(wěn)定的表達(dá)細(xì)胞系。

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pMAM1-nFc （Cat＃：mAb014） 和pMAM1-cFc （Cat＃：mAb015）

如果血清分泌在細(xì)胞外，則無(wú)血清哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)可以方便，地純化高純度蛋白質(zhì)。如果蛋白質(zhì)是天然分泌蛋白，通常很容易在上清液中表達(dá)蛋白質(zhì)。然而，在許多情況下，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或部分蛋白質(zhì)，例如細(xì)胞表面蛋白質(zhì)的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，很難在分泌途徑中表達(dá)，這很可能是由于其天然易位機(jī)制的改變。難于表達(dá)的蛋白質(zhì)與易表達(dá)的蛋白質(zhì)如Fc的融合是一種解決方案，因?yàn)橐妆磉_(dá)的蛋白質(zhì)可以充當(dāng)將難于表達(dá)的蛋白質(zhì)帶出細(xì)胞的載體。為此目的設(shè)計(jì)了載體pMAM1-nFc和pMAM1-cFc。它們基于通過(guò)在目標(biāo)蛋白質(zhì)的N或C末端引入人IgG1 Fc片段來(lái)構(gòu)建pMAM1。為了方便純化，在融合蛋白的N末端設(shè)計(jì)了His8標(biāo)簽。為避免Fc與目標(biāo)蛋白之間可能的構(gòu)象障礙，在Fc與多克隆位點(diǎn)（MCS）之間設(shè)計(jì)了柔性（G4S）3接頭。還可通過(guò)在兩個(gè)蛋白之間設(shè)計(jì)的位點(diǎn)通過(guò)TEV切割從融合蛋白中去除Fc片段。細(xì)胞表面抗原的胞外域的制備通常是非常具有挑戰(zhàn)性的。這兩個(gè)融合載體能夠高水平表達(dá)大多數(shù)細(xì)胞表面蛋白的胞外域。

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人類VH，VL和VK引物  （貨號(hào)：  mAb 016）

基于大的抗體數(shù)據(jù)庫(kù)IMGT，我們?cè)O(shè)計(jì)了一組能夠擴(kuò)增所有人類抗體庫(kù)的簡(jiǎn)并引物。正向引物退火至V基因的一框架區(qū)，而反向引物退火至J基因?？偣矠閂H設(shè)計(jì)了7個(gè)正向和3個(gè)反向引物。為VK設(shè)計(jì)5個(gè)正向和4個(gè)反向引物，為VL設(shè)計(jì)9個(gè)正向和5個(gè)反向引物。IgM的反向引物也可用于天真的文庫(kù)構(gòu)建。 

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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
 

*0 （Cat＃：mAb017） （20個(gè)反應(yīng)，價(jià)格$ 200，化學(xué)）
*0具有化學(xué)感受態(tài)的大腸桿菌在單個(gè)試管中的轉(zhuǎn)化效率為1 x 109 cfu / µg質(zhì)粒DNA。它們是克隆和質(zhì)粒繁殖的理想選擇。它們?cè)试S高拷貝數(shù)質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

BL21 （Cat＃：mAb018） （20個(gè)反應(yīng)，售價(jià)200美元，化學(xué)）
BL21化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞在單個(gè)試管中的轉(zhuǎn)化效率為1 x 108 cfu / µg質(zhì)粒DNA。BL21大腸桿菌細(xì)胞是高水平表達(dá)無(wú)毒重組蛋白的理想選擇。

TG1 （Cat＃：mAb019） （20個(gè)反應(yīng)，售價(jià)200美元，電穿孔）
TG1是構(gòu)建噬菌體展示庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞。TG1電感受態(tài)細(xì)胞具有1×1010 cfu / µg質(zhì)粒DNA的率，非常適合噬菌體展示抗體或肽庫(kù)的構(gòu)建。 
 

加載緩沖區(qū)

DNA上樣緩沖液（10 x） （Cat＃：mAb020）（3 x 1 ml，$ 30）
DNA上樣緩沖液（10X）是一種液體緩沖液，可輕松裝載和跟蹤
瓊脂糖或天然聚丙烯酰胺凝膠中的DNA樣品。 

蛋白質(zhì)上樣緩沖液（6x） （Cat＃：mAb021）（10 ml，$ 15）
Laemmli是一種用于蛋白質(zhì)電泳和蛋白質(zhì)印跡的樣品緩沖液。將每一體積的6X樣品緩沖液添加到五體積的蛋白質(zhì)樣品中，煮沸或加熱5-10分鐘。