Parr Instrument Company是一家私人控股公司,位于伊利諾伊州莫林市211-53rd街,從事設(shè)計,制造和銷售用于測試燃料以及在熱和壓力下進行化學反應(yīng)和測試的實驗室儀器和設(shè)備。
Parr反應(yīng)器和壓力容器包括標準設(shè)計和實驗室到小型試驗工廠規(guī)模的定制設(shè)備。這種壓力設(shè)備的用途廣泛應(yīng)用于化學,石化,制藥和生物技術(shù)研究,開發(fā)和控制實驗室。
Parr量熱計用于測試各種固體和液體燃料,食品和其他可燃材料。許多*的設(shè)計和高度自動化的儀表已經(jīng)添加到其不斷擴展的燃料測試儀器系列中。
parrinst 4635說明書
4635細胞破裂血管
4635,920 mL容器是通用型號,具有處理大小從幾毫升到600毫升的樣品的能力。
每個容器配備一個1831氮氣填充連接,提供從商用氮氣瓶填充容器所需的所有配件。1831連接包括一個帶標準CGA-580聯(lián)軸器的控制閥,用于連接氮氣瓶,罐壓力計和用于連接容器入口閥的柔性尼龍壓力軟管。每個容器都包括用于容器頭的額外O形環(huán)。
氮減壓方法特別適用于治療哺乳動物和其他膜結(jié)合細胞。它還成功地用于處理植物細胞,從受精卵釋放病毒和治療脆弱的細菌。不建議用于未經(jīng)處理的細菌細胞,但可以通過使用各種預(yù)處理程序來削弱細胞壁來消除這種限制。酵母,真菌,孢子和其他具有堅硬壁的材料對這種方法反應(yīng)不佳。
哺乳動物細胞
Hunter和Commerford(1)于1961年發(fā)表了一篇論文,該論文已成為通過氮減壓方法破壞哺乳動物組織的基本“烹飪手冊”。盡管這些作者報道的大部分工作都是用大鼠組織完成的,但他們也治療了脾臟,白細胞,淋巴結(jié),腫瘤,胸腺和其他組織,以確定該方法的一般適用性。他們的結(jié)果清楚地表明,通過這種方法可以破壞細胞,對組分的物理和化學損害小。
H&C在1300psi及以上的壓力下獲得*破壞,而低于700psi的壓力使全細胞和勻漿中的細胞團塊離開。在800和1000psi之間的壓力下,產(chǎn)生細胞完整的無細胞勻漿。在容器中處理之前,使用手壓機預(yù)先切碎組織。發(fā)現(xiàn)細胞核的狀態(tài)取決于懸浮緩沖溶液的組成。使用等滲溶液獲得了良好的結(jié)果,而在懸浮于非常稀的溶液中的細胞中觀察到核膨脹和破裂。這歸因于滲透膨脹,H&C發(fā)現(xiàn)可以通過添加無機鹽(例如氯化鈉)或有機溶質(zhì)(例如蔗糖或甘油)來控制滲透膨脹。當懸浮介質(zhì)不含鈣時,細胞核非常脆弱,但發(fā)現(xiàn)存在少至0.0002M的氯化鈣可穩(wěn)定核。乙酸鎂也可用于此目的。
為了確定對不穩(wěn)定細胞的損害程度,H&C研究了脫氧核糖核蛋白DNP,因為它易受化學和物理應(yīng)力的影響,從核部分中獲得超過90%的DNP回收率,并且具有優(yōu)異的材料保存性。他們還比較了通過氮減壓方法制備的線粒體懸浮液與PotterElvehjem勻漿器中產(chǎn)生的懸浮液的酶活性。沒有檢測到酶活性的差異。
Dowben,Gaffey和Lynch(2)使用氮減壓技術(shù)從L細胞,成纖維細胞,羊水中的人類胎兒細胞,大鼠肝臟和雞胚肌肉制備多聚核糖體。使用600psi壓力,它們獲得優(yōu)于99.9%的破裂并且回收超過95%的原子核。多聚體產(chǎn)率比在Dounce組織研磨機中均質(zhì)化細胞時高兩到三倍。此外,它們具有更好的定義和更可重復(fù)的配置文件。還報道了通過氨基酸摻入測量的顯著更高的活性。
Short,Maines和Davis(4)將氮減壓方法與Potter-Elvehjem類型的PTFE研杵和玻璃管均質(zhì)器進行比較,以制備用于藥物代謝研究的微粒體級分。減壓方法一致地產(chǎn)生超過杵和管分餾的每克組織的微粒體蛋白質(zhì)的兩倍。發(fā)現(xiàn)每毫克微粒體蛋白的酶活性對于兩種方法基本相同,但必須記住,氮減壓產(chǎn)生的微粒體蛋白質(zhì)是每克原料的兩倍多。
在顯微鏡檢查下,發(fā)現(xiàn)通過減壓方法產(chǎn)生的勻漿是無細胞的,而在研杵和管??勻漿中觀察到許多細胞團塊。微粒體顆粒的電子顯微鏡顯示,對于減壓方法,顆粒更小并且尺寸更均勻??傊?,這些作者指出,氮氣減壓方法比PTFE杵和玻璃管方法更有效,可能變化更小。
與杵和管方法的比較。在芝加哥退伍軍人管理研究醫(yī)院的近申請中,用細胞破碎容器在15分鐘內(nèi)制備了用杵和管生產(chǎn)需要8小時的勻漿。在另一個實驗室中,每天使用細胞破碎容器將高達12千克的大腦均質(zhì)化。
Wallach及其同事(5)使用氮減壓方法獲得完整的細胞分離,核損傷小。使用0.0002M醋酸鎂緩沖液與Ehrlich Ascites Carcinoma細胞一起工作,他們研究了磷脂的細胞分布。Wallach發(fā)表了許多其他論文,其中減壓技術(shù)已被用于制備細胞膜。
疫苗準備
許多商業(yè)實驗室發(fā)現(xiàn)氮減壓技術(shù)對于從受精卵中釋放病毒非常有效。該方法可以使用Parr為此目的提供的較大破碎容器按比例放大用于商業(yè)生產(chǎn)。
細菌細胞
弗雷澤(7)于1951年發(fā)表了一些關(guān)于氮減壓及其對大腸桿菌影響的早研究。弗雷澤的工作受到限制,因為他的船只被限制在900 psi的工作壓力下。然而,使用在對數(shù)生長期收獲的大腸桿菌,他能夠在一次通過中獲得75%的破裂并且在連續(xù)兩次通過中獲得超過90%的破裂。與其他具有堅韌細胞壁的細菌和生物體的結(jié)果混合在一起。
有幾種方法可以處理具有堅韌壁的細菌細胞以通過氮減壓方法促進破壞。這些措施包括:(1)在整個墻壁發(fā)育之前的早期生長階段收獲細胞; (2)在抑制細胞壁形成的試劑存在下培養(yǎng)細胞; (3)在加工前使用溶菌酶削弱壁,或(4)在應(yīng)用氮氣減壓法之前使用機械預(yù)處理來削弱細胞壁。盡管這些技術(shù)已成功應(yīng)用于許多具有重細胞壁的細菌,但它們對酵母,真菌,孢子和具有非常重或堅硬壁的類似細胞不是同樣有效的。
植物細胞
Loewus和Loewus(10)發(fā)表了許多論文,其中描述了氮破壞程序在植物細胞和組織培養(yǎng)植物細胞中的應(yīng)用。他們還報告說通過這種方法打破硅藻取得了相當大的成功。
(1) | Hunter,MJ和Commerford,SL,1961,“哺乳動物組織的壓力均質(zhì)化。”Biochim。生物物理學。Acta,47:580-6。 |
(2) | Dowben,RM,Gaffey,TA和Lynch,PA,1968。“通過氮氣蝕破壞細胞后高產(chǎn)率地分離肝肌多聚核糖體。”FEBS Letters,Vol。2,,第1-3頁。 |
(3) | Dowben,RM,Lynch,PM,Nadler,HC和Hsia,DY,1969。“來自L. Cells的Polyribosomes。”Exp。細胞研究,58:167-9。 |
(4) | 簡,CR,Maines,MD和Davis,LE,1972。“通過快速減壓均質(zhì)化制備用于藥物代謝研究的肝微粒體部分。”Proc。SOC。EXPER。生物學。Med。,140:58-65。 |
(5) | Wallach,DFH,Soderberg,J。和Bricker,L.,1960。“Ehrlich和腹水癌細胞的磷脂組成和intracelfular distribution。”Cancer Research,20:397-402。 |
(6) | Manson,LA,F(xiàn)oshi,GV和Palm,J.,1963。“移植抗原與正常和惡性小鼠組織的微粒體pipoprotein的關(guān)聯(lián)。”J. Cell and ComD。生理學,61:109-18。 |
(7) | 弗雷澤,D.,1951年。“通過釋放氣體壓力來破滅細菌。”自然,167:33-4。 |
(8) | Avis,PJG,1967。“在亞細胞成分,制備和分餾中。”(Ed.Birnie,GD和Fox,SM)Chapt。1,哺乳動物細胞的壓力均質(zhì)化。由紐約Plenum出版社出版。 |
(9) | Manson,LA,1972“通過壓力均質(zhì)化提取膜性移植抗原。”(Ed.Kahan,BD和Reiifeld,RA)。9,移植抗原。由紐約Academic Press出版。 |
(10) | Loewus,MW和Loewus,F(xiàn).,1971。“從acer pseudoplatanus L.細胞培養(yǎng)物中分離和表征d-葡萄糖6-磷酸環(huán)化酶(NDA依賴性)。植物生理學。(1971)48:255-260。 |
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